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操作需謹(jǐn)慎，WB實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注意這些！

WB實(shí)驗(yàn)，蛋白質(zhì)印跡又稱免疫印跡，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。實(shí)驗(yàn)原理：一個(gè)基因表達(dá)結(jié)果是產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或酶)。因此，檢測(cè)蛋白質(zhì)是測(cè)定基因表達(dá)的主要標(biāo)志，檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法很多，除ELISA法外，也可用與檢測(cè)DNA和RNA相類似的吸印方法。而樣本制備是WB實(shí)驗(yàn)的開始也是重要的一步，它的操作雖然并不復(fù)雜，卻有很多需要注意的細(xì)節(jié)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要的目標(biāo)蛋白的不同，大致可以分為三種：總蛋白、膜蛋白和核蛋...

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白細(xì)胞稀釋液的操作過程

白細(xì)胞稀釋液是一種應(yīng)用在血液檢測(cè)過程中的試劑，白細(xì)胞稀釋液是一種具有酸堿緩沖作用、恰當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和電導(dǎo)率的電解質(zhì)平衡液。當(dāng)用于稀釋待測(cè)血樣時(shí)，其適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度能再一定時(shí)間內(nèi)完整地保持血細(xì)胞原來的體積，而其合適的電導(dǎo)率能保證獲得與細(xì)胞體積相應(yīng)的脈沖大小，保證測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確。采用的原理是將血液用稀釋液作定量稀釋后，紅細(xì)胞*溶解，注入計(jì)數(shù)池在顯微鏡下計(jì)數(shù)，然后計(jì)算出血液中白細(xì)胞數(shù)。白細(xì)胞稀釋液的操作過程：1、小試管1支，加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。2、用微量吸管準(zhǔn)確吸取末稍血20μl...

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堿性固綠染色液的使用步驟

不同的氨基酸帶有不同化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈基團(tuán)，有的帶有堿性側(cè)鏈，有的帶有酸性側(cè)鏈，由此組成的蛋白質(zhì)具有不同數(shù)目的堿性基團(tuán)和酸性基團(tuán)，這些基團(tuán)會(huì)使蛋白質(zhì)在不同的pH溶液中帶有不同的凈電荷，整個(gè)蛋白質(zhì)分子帶正電荷多，即為堿性蛋白。堿性固綠染色液是利用堿性蛋白質(zhì)與帶有負(fù)電荷的堿性染料固綠結(jié)合進(jìn)行染色，細(xì)胞中含量最為豐富的堿性蛋白為組蛋白，主要存在于細(xì)胞核中，因此染色后細(xì)胞核大部分被染成綠色。使用步驟：1.取新鮮血液1滴滴于載玻片一端，推片，室溫晾干。2.涂片浸入70%乙醇中固定5min，...

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草酸銨結(jié)晶紫染色液的介紹

草酸銨結(jié)晶紫染色液是革蘭氏染色法中的一種成分,主要由草酸銨、結(jié)晶紫、乙醇等組成。革蘭陽(yáng)性菌染色中,細(xì)胞經(jīng)草酸銨結(jié)晶紫染色后再經(jīng)Gram碘液處理，形成不溶性復(fù)合物，該復(fù)合物不能通過細(xì)胞壁,不易被脫色,所以保持紫色。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,而用以分類鑒定。草酸銨結(jié)晶紫染色液是一種組織或細(xì)胞染色時(shí)常用的可以把細(xì)胞核染成深紫色的染色液。用于革蘭氏染色。結(jié)晶紫是一種堿性染料，可以和細(xì)胞核中的DNA結(jié)合，可以與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合把核染...

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那些年對(duì)于ELISA試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)的疑惑

“隔壁的實(shí)驗(yàn)室又發(fā)了3篇SCI文章，我們還在處理數(shù)據(jù)，這幾家的試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)怎么都不一樣？”小編每當(dāng)聽到這句話，每次感受都不同。對(duì)那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者、那些把青春獻(xiàn)給實(shí)驗(yàn)室的研究生們表示深深的同情。那么，造成試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)不一樣的原因，除了一些實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等客觀因素外，還有試劑盒質(zhì)量參數(shù)，如重復(fù)率、板內(nèi)差、板間差、線性稀釋、回收率等。但是，最重要的影響因素可能是作為檢測(cè)標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以，下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾個(gè)疑惑。不同...

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在使用熒光蛋白上樣緩沖液需要關(guān)注哪些細(xì)節(jié)？

熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對(duì)SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染，標(biāo)記上熒光。實(shí)驗(yàn)完成以后，凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析，無需染色脫色。熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng)，背景低?？蓪?duì)所有蛋白進(jìn)行染色，不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中，游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率一致，跑膠結(jié)束時(shí)移至凝膠末端，背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Westernblot的SDS-PAGE...

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全蛋白提取試劑盒的優(yōu)勢(shì)及使用注意要點(diǎn)

全蛋白提取試劑盒可用于從哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液勻漿裂解組織或細(xì)胞，提取過程簡(jiǎn)便高效。獲得的全蛋白可用于WesternBlot、IP等后續(xù)研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究。全蛋白提取試劑盒具有哪些優(yōu)勢(shì)？1.提取的蛋白質(zhì)包括膜、核、核基質(zhì)和胞質(zhì)蛋白，而且更大限度保持蛋白質(zhì)活性。2.可以用于培養(yǎng)細(xì)胞，有可以用于動(dòng)物組織蛋白質(zhì)的提取。3.避免蛋白酶和磷酸酶對(duì)蛋白質(zhì)的降解，保持蛋白質(zhì)的完整性和天然活性。4.不需要超速度離心，可以同...

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人抗胰蛋白酶elisa試劑盒的儲(chǔ)存及有效期說明

人抗胰蛋白酶elisa試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入微生物化的目標(biāo)抗體，將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記和親和素，再次洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波...

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