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詳解單克隆抗體的制備過程（索萊寶實驗室）

單克隆技術又名雜交瘤技術。由G.K?hler和Milstein1975年創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產(chǎn)抗體。單克隆抗體的制備過程主要有以下六個環(huán)節(jié)，具體為抗原指標、免疫動物選擇、免疫程序的確定、免疫、細胞雜交與選擇培養(yǎng)。下面詳細介紹單克隆抗體制備過程每一步的做法。1、抗原制備制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加，同時可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純越好，應根據(jù)所研究的抗原和...

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Western Blot內(nèi)參抗體如何選擇

內(nèi)參抗體種類很多，比如beta-actin、beta-tubunlin、GAPDH、α-tubunlin等，那么針對自己的實驗，我們該如何選擇呢?下面簡單介紹下選擇內(nèi)參抗體應遵循的原則：一.樣本種屬來源：先要考慮的就是實驗樣本來源于什么物種。1、哺乳動物的組織或者細胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB、HistoneH3、Na,Katpase等。2、植物來源實驗樣本，則可以選擇plantactin、Rubisco等。3、其他來源樣本研究...

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提取植物dna步驟（索萊寶試劑盒）

試劑盒提取植物dna已經(jīng)獲得廣泛應用。各個生化試劑廠家也都有了dna提取試劑盒產(chǎn)品。索萊寶作為國內(nèi)生化試劑供應商提供了各類dna提取試劑盒。今天給大家介紹試劑盒提取植物dna步驟。當然是以索萊寶產(chǎn)植物基因組dna提取試劑盒產(chǎn)品為例。使用前先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。1、植物組織預處理：取新鮮植物組織（不超過100mg）或干重組織（不超過20mg），于液氮中充分研磨細粉狀，讓液氮自然揮發(fā)。2、將研磨好的植物組...

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提取酵母質(zhì)粒步驟跟方法

酵母質(zhì)粒提取可以用試劑盒提取，也可以直接用裂壁酶處理后采用堿裂解法提取質(zhì)粒。推薦使用索萊寶供應的酵母質(zhì)粒提取試劑盒，無需使用酚、CCL4等有毒試劑，操作安全。下面我們就用索萊寶酵母質(zhì)粒提取試劑盒為例講解酵母質(zhì)粒提取方法和步驟。1.接種單菌落(待檢測酵母細胞)于25mLYNB(補加氨基酸營養(yǎng)物)培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)隔夜。2.第二天取一滴菌液于進行顯微鏡下觀察,目鏡用16,物鏡用40倍觀察細胞壁破碎前的狀態(tài),其成桿狀,流動性比較下.3.取10ml的培養(yǎng)酵母菌液,5000g離心...

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提取DNA的方法（總結）

dna提取是一項經(jīng)常要做的實驗，下面我們就總結了四種dna提取方法并做詳細說明和比較。一.濃鹽法提取dna：A.利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的CCL4一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質(zhì),此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及CCL4相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA鈉鹽沉淀出來.B.也可用0.15MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白...

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生物實驗中瓊脂粉常見問題

問題1：使用瓊脂粉配置的MS培養(yǎng)基顏色明顯變黃？影響實驗？產(chǎn)品批次不一樣，有些批次的瓊脂粉就是顯黃色，不是質(zhì)量問題，不影響使用。進口產(chǎn)品也有直接指出瓊脂粉是黃色為正?，F(xiàn)象。問題2：凝膠強度？答：凝膠強度（1.5%）≥800g/cm2800-1200g/cm21.5g瓊脂粉溶于100ml水，溶解凝固后要放置20℃恒溫箱中靜置10小時以上，再測定凝膠強度。與溫度，水質(zhì)等有關。一般瓊脂粉和卡拉膠，夏季使用濃度要比冬季偏高。夏季溫度高，保存時間久，可能會有部分降解，所以要達到同樣凝膠...

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常用的剛果紅培養(yǎng)基，你知道屬于哪一類培養(yǎng)基嗎？

培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。一般分為天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基等，那我們常用的剛果紅培養(yǎng)基屬于哪一類的？剛果紅培養(yǎng)基屬于哪一類培養(yǎng)基：剛果紅培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基,因為后能在培養(yǎng)基上看到因分解纖維素形成的透明圈,在液體培養(yǎng)基中不可能形成透明圈.是鑒定培養(yǎng)基,因為該培養(yǎng)基上也能生長其他微生物,例如有些自養(yǎng)型微生物就能在該培養(yǎng)基上生存；不過只有纖維素分解菌周圍才會形成透明圈,從而將該菌落鑒定出來.也是區(qū)分選擇培養(yǎng)基,例如在配...

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感受態(tài)細胞相關問題

如何選擇合適的宿主菌：1、所選的宿主菌株應對所用質(zhì)粒的抗生素抗性基因敏感。2、如進行藍/白斑篩選，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區(qū)應在染色體或附加體上缺失掉(lacZΔΜ15)。*0和DH5α都能用于藍/白斑篩選。3、要表達重組蛋白，可使用帶有可誘導的T7RNA聚合酶基因的菌株，如BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS。4、使用pGEM載體克隆大片段時(7-8kb)，經(jīng)轉化的菌株在30℃而不是在37℃生長，更有利于復蘇。作簡單的亞克隆連接實驗，亞克隆轉化效率的感受...

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