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熒光免疫染色和DAPI染色實(shí)驗(yàn)步驟

免疫染色實(shí)驗(yàn)方法和步驟免疫染色(immunolstaining)包括免疫熒光(immunolfluorescence)、免疫組化(immunolhistochemistry)、免疫細(xì)胞化學(xué)(immunolcytochemistry)等，可以參考如下步驟進(jìn)行操作。1.樣品準(zhǔn)備(Samplepreparation)對(duì)于貼壁細(xì)胞：可以直接用多孔板，例如6孔板、24孔板等，培養(yǎng)細(xì)胞，然后到預(yù)定時(shí)間時(shí)進(jìn)行固定等后續(xù)操作。也可以用潔凈的蓋玻片，70%乙醇中浸泡后，用無菌的鑷子放置到6孔板...

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DAPI染DNA的原理及使用方法（包含DAPI配制）

DAPI染DNA的原理及使用方法DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式為C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。DAPI是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料。它結(jié)合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對(duì)處，一個(gè)DAPI分子可以占據(jù)三個(gè)堿基對(duì)的位置。結(jié)合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強(qiáng)度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測(cè)，根據(jù)熒光的強(qiáng)度可以確定DNA的量。另外，因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜，它可...

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透析袋原理介紹及使用方法步驟

自1861年發(fā)明透析方法今已有一百多年。透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)便常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi)。下面分別介紹透析袋和透析膜使用方法和步驟透析袋使用前處理方法：1.把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度（10-20cm）的小段。2.在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和10mmol...

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透析袋分子量的選擇 如何選擇合適的透析袋

透析是一個(gè)簡(jiǎn)單的擴(kuò)散過程，溶質(zhì)中小分子物質(zhì)從高濃度溶液通過半透性膜擴(kuò)散到低濃度溶液中，直滲透壓達(dá)到平衡。由于多孔膜的選擇性，使得溶質(zhì)中小分子物質(zhì)可以通過，而較大物質(zhì)則被截留，從而分離出不同大小分子量的物質(zhì)，依據(jù)分子量大小截留，可用于分離工藝，改變或控制透析的條件，可在多種透析應(yīng)用中得到預(yù)期效果，通過截留分子量（MWCO）可使目標(biāo)分子得到分離。所以透析袋分子量的選擇就決定了實(shí)驗(yàn)的成敗。這篇文章就詳細(xì)介紹了如何選擇合適的透析袋。透析膜的材質(zhì)透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等，但用的多的還...

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姬姆薩染液配制方法及原理

姬姆薩染液又稱吉姆薩染色液，姬姆薩染原液，為天青色素、伊紅、次甲藍(lán)的混合物。常用作對(duì)血液涂抹標(biāo)本、血球、瘧原蟲、立克次體以及骨髓細(xì)胞、脊髓細(xì)胞等標(biāo)本進(jìn)行染色的染色方法。姬姆薩染色液的配制方法很簡(jiǎn)單，但是現(xiàn)在很多實(shí)驗(yàn)室都開始買現(xiàn)成的姬姆薩染液，這樣節(jié)省了時(shí)間，染色液的價(jià)格也不貴。姬姆薩染液配制方法：甲液：取瑞氏染粉1克,姬姆薩染粉0.3g,置于干燥清潔研缽中，另備甲醇（不含水或丙酮）500ml分?jǐn)?shù)次加少量甲醇研磨，分次收集于棕色玻璃瓶中，每天早晚各搖3分鐘，經(jīng)1星期后即可使用。...

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簡(jiǎn)述瑞士-姬姆薩染色液的步驟

瑞氏-姬姆薩染色液是利用Romanowsky??Stain?技術(shù)原理改良而成的。主要應(yīng)用于血液和骨髓涂片染色。姬姆薩染色液對(duì)胞漿著色力較強(qiáng)，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，著色清晰，色澤純正，但是對(duì)胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯示較差。瑞氏-姬姆薩染色液原理瑞氏-姬姆薩染色液主要應(yīng)用于血液和骨髓涂片染色，它是利用Romanowsky??Stain?技術(shù)原理改良而成的。細(xì)胞的著色過程是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理吸附作用，又有化學(xué)親和作用。各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分...

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嘌呤霉素篩選細(xì)胞的原理

嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結(jié)構(gòu)，能夠同氨基酸結(jié)合，代替氨?；膖RNA同核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合，并摻入到生長(zhǎng)的肽鏈中。用嘌呤霉素篩選細(xì)胞方法如下：嘌呤霉素篩選細(xì)胞轉(zhuǎn)染（24孔板進(jìn)行）或電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)24小時(shí)，按10%密度傳代（傳36mm平皿），繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，待細(xì)胞密度增20%-25%回合時(shí)；去掉培養(yǎng)液，PBS洗一次，加入按照佳嘌呤霉素篩選細(xì)胞的濃度（殺傷曲線試驗(yàn)確定）配制好的嘌呤霉素篩選細(xì)胞培養(yǎng)基2-3ml。根據(jù)培養(yǎng)...

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嘌呤霉素的作用有哪些

嘌呤霉素(puromycin;PM)是一種抗生素，廣泛用作蛋白質(zhì)合成的抑制劑。其結(jié)構(gòu)與氨酰tRNA3′端上的AMP結(jié)構(gòu)相似，肽酰轉(zhuǎn)移酶能促使氨基酸與嘌呤霉素結(jié)合形成肽酰嘌呤霉素，從核糖體上脫落，從而使蛋白質(zhì)合成反應(yīng)中斷。嘌呤霉素的作用如下：嘌呤霉素的作用：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomycesalboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，嘌呤霉素Puromycin通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞。嘌呤霉素Pur...

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