酪*酸酶（Tyr）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC4055
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前每瓶加入7 mL提取液充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用。溶解后易氧化，24h內(nèi)要盡快用完。

2. 試劑三：臨用前加入1.65mL蒸餾水充分溶解待用，該試劑為飽和溶液，若有析出可置于45℃水浴鍋加熱溶解；用不完的試劑2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說(shuō)明：
酪*酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一種單酚單加氧酶，是具有雙功能的含銅糖蛋白，廣泛存在于植物、酵母和動(dòng)物組織中。酪*酸酶是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶，也是引起果蔬酶促褐變的主要因素，同時(shí)也對(duì)昆蟲的免疫及生長(zhǎng)有重要影響。
酪*酸酶催化L-多巴生成多巴醌，其與MBTH生成紫紅色物質(zhì)，在505nm下有特征吸收峰，據(jù)此可以計(jì)算出酪*酸酶的活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
需自備的儀器和用品：
   可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
1、當(dāng)樣本ΔA測(cè)定大于1時(shí)，建議將樣本用蒸餾水稀釋后測(cè)定。計(jì)算時(shí)注意同步修改計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1055g大鼠脾組織加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.153-0.083=0.070，按樣本質(zhì)量計(jì)算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/g 質(zhì)量）=103.7×ΔA測(cè)定÷W×F=68.81U/g 質(zhì)量。

2. 取0.1020g綠蘿加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后用蒸餾水稀釋8倍按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=1.037-0.083=0.954，按樣本質(zhì)量計(jì)算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/g 質(zhì)量）=103.7×ΔA測(cè)定÷W×F =7759.2U/g 質(zhì)量。

3. 取27μL豬血清后按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.429-0.083=0.346，按樣本液體體積計(jì)算酪*酸酶活性得：酪*酸酶活性（U/mL）=103.7×ΔA測(cè)定=35.88U/mL。

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