超氧陰離子清除能力檢測試劑盒說明書

                                            微量法

貨號：BC1415

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑二：臨用前每瓶加 5.34mL 蒸餾水充分溶解。2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說明：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導(dǎo)的作用，但積累過多時會對細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞 作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO₂^－，NO₂^－與對氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm 處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。    注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器，冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000 g，4℃，離心10 min，取上清，置于冰上待測。

2、液體樣本：直接檢測。若有渾濁則離心后取上清待測。

3、細(xì)胞樣本：收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)胞（功率200w，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），然后10000g，4℃，離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟

1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至530 nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表：

三、超氧陰離子清除能力計算

超氧陰離子清除率（%）=（A空白-A測定）÷A空白×100%

注意事項：   

1. 樣本制備好之后，立刻進(jìn)行測定，請勿將樣本進(jìn)行長時間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。

實驗實例：

1. 稱取0.1 g黃楊葉片組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿，10000 g，4℃條件下離心10 min；取上清置于冰上待測。使用96孔板，按照測定步驟操作，計算A空白=0.762，A測定=0.311，按公式計算超氧陰離子清除率=（0.762-0.311）÷0.762×100%=59.18%

2. 吸取25μl的羊血清，使用96孔板，按照測定步驟操作，計算A空白=0.762，按公式計算超氧陰離子清除率=（0.762-0.342）÷0.762×100%=55.12%

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